Что такое справка иха

Тест на антиген COVID-19 методом ИХА

В нашей клинике появилась возможность экспресс — тестирования на выявление антигена SARS-CoV-2 (COVID-19) иммунохроматографическим методом (ИХА).

Быстрый способ диагностики COVID-19

Экспресс-тест на выявление антигена SARS-CoV-2 — быстрый способ диагностики COVID-19 на ранних стадиях заболевания методом иммунохроматографического анализа.

Иммунохроматографический анализ — это метод, основанный на принципе тонкослойной хроматографии и включающий реакцию между антигеноми и соответствующими ему антителом в биологических материалах.

  • Антиген — это вещество, которое определяется организмом человека как чужеродное и которое может запускать иммунную (защитную) реакцию.
  • Антитела — это белки, образующиеся клетками организма человека в ответ на внедрение в него антигена.

Одним из самых важным свойством антител является их способность избирательно связываться с антигеном. Антитела связываются только с определенными антигенами. На этой уникальной особенности антител и основаны все иммунологические методы анализа, в том числе и ИХА.

Отличие ИХА от ПЦР-теста

Суть ПЦР — в выявлении этиологии инфекции. Это высокочувствительный метод, который позволяет поставить точный диагноз даже на ранней стадии течения заболевания, когда его симптомы еще не проявились

Тест ИХА нужен для того, чтобы сократить время между постановкой диагноза пациенту и назначением ему терапии

Когда нужно сдать тест на антиген к SARS-CoV-2

Тест позволяет получить сразу же на месте качественную оценку на предмет инфицирования SARS-CoV-2. Поэтому ИФА тестирование уместно, если вы хотите исключить возможность заражения коронавирусной инфекцией и вам необходимо получить результат максимально быстро. Например, у вас проявились симптомы ОРВИ и вы хотите знать, что это точно не COVID-19.

Внимание! QR-код при ИХА не выдается

Тестирование иммунохроматографическим методом для получения QR-кода не подойдет. Если данных о том, что вы переболели, нет в федеральном регистре заболевших, вам нужно сдать ПЦР-тест и получить QR-код, подтверждающий наличие отрицательного ПЦР-теста.

Только ПЦР-тест является вашим иммунным паспортом

Получить QR-код могут только граждане сдавшие ПЦР-тест на наличие коронавирусной инфекции и получившие отрицательный результат за последние 72 часа

Справка о наличии антител к коронавирусу не является основанием для получения QR-кода.

Подготовка к анализу

  1. В течение 6 часов до сдачи анализа не орошать ротовую полость лекарствами, не рассасывать таблетки.
  2. За 3 часа до процедуры не есть, не пить, не курить, не чистить зубы и не полоскать рот.

Как проходит диагностика

  • Для теста берется мазок из носоглотки (через ноздрю).
  • Готовность результата — в течение 30 минут.

Результаты анализа

Анализ на антиген — качественный. Это означает, что заключение по его результатам может быть двух видов:

  • результат отрицательный — инфекции не выявлено;
  • результат положительный — инфекция обнаружена.

В случае положительного результата рекомендуется подтверждение диагноза другими методами (прежде всего, ПЦР).

Вы также можете пройти диагностику на антитела к SARS-CoV-2, это позволит уточнить стадию заболевания, а также подтвердить наличие сформированного иммунитета к COVID-19.

Источник

Научная электронная библиотека

Морозова В. С., Габрильянц О. А., Мягкова М. А.,

3.2.4. Иммунохроматографический анализ

К иммунохимическим методам относится также метод иммунохроматографического анализа (ИХА, экспресс-тесты) – качественный скрининговый предварительный метод, позволяющий быстро, в течение нескольких минут, провести анализ в любых условиях, в т.ч. «полевых» [17]. Этот метод заслуживает наиболее пристального внимания, т.к. является самым распространенным при выявлении ПАВ и не требует оборудования и специалистов для проведения. Экспресс-тесты используют в химико-токсикологических лабораториях для скрининга, при прохождении медосмотров при устройстве на работу, при тестировании абитуриентов и студентов вузов. Метод может использоваться для тестирования водителей на дорогах, в домашних условиях родителями для контроля детей. Объектами исследования в данном случае являются моча, жидкость ротовой полости, потожировые выделения (редко).

Читайте также:  Кто должен подписать доверенность юридического лица

К преимуществам ИХА следует отнести:

● быстроту и легкость в использовании;

● малые объемы образца, отсутствие пробоподготовки;

● дешевизну для производителя и потребителя;

● возможность производства тестов в больших объемах;

● простоту чтения и интерпретации результата;

● высокую чувствительность и вопроизводимость;

● возможность количественного определения;

● возможность использования портативных ридеров, совместимых с компьютером;

В связи с большим количеством преимуществ по сравнению с другими скрининговыми методами, ИХА получил широкое применение
и находится на первом месте на мировом рынке диагностики. ИХА применяется в различных областях медицины и народного хозяйства:

● банки крови и плазмы;

● промышленность (контроль качества, безопасности, идентификация продукта, эко-контроль);

● сельское хозяйство, агрономия;

Тест-полоски для ИХА являются чрезвычайно удобными и простыми в использовании, однако они имеют сложное строение и процесс разработки каждого вида ИХА является чрезвычайно трудоемким и высокотехнологичным.

ИХА-тест (иммунохроматографическия полоска) состоит из следующих основных элементов: пластиковой подложки, на которую наклеены все остальные компоненты теста, фильтра (прокладки для образца), прокладки или мембраны с конъюгатом, хроматографической мембраны, содержащей одну или несколько зон захвата иммунных комплексов и контрольную зону захвата, мембраны абсорбции (впитывающая прокладка) (рис. 13). Тест-полоска может быть помещена в пластиковый корпус, в котором имеется приемное и тестовые «окна».

Рис. 13. Схематическое изображение иммунохроматографической тест-полоски

Метод ИХА, так же как и ИФА, имеет несколько форматов. Наиболее распространены 2 схемы: прямой (сэндвичный) и непрямой конкурентный метод.

В схеме прямого (сэндвичного) ИХА используется конъюгат специфических антител с красящей меткой (в случае визуальной оценки результата), нанесенный на мембрану для конъюгата. На тестовой линии иммобилизованы антитела, специфические к данному аналиту, а на контрольной линии – антивидовые антитела, специфические к первичным антителам. При нанесении образца, содержащего анализируемое вещество, на мембране с конъюгатом происходит связывание аналита с конъюгатом Ат-метка. Затем иммунный комплекс попадает в тестовую зону, где он связывается со специфическими антителами, образуя «сэндвич» Ат-Аг-Ат-метка. избыток несвязавшегося конъюгата связывается с антивидовыми антителами на контрольной линии. Таким образом, выявление 2-х линий на тест-полоске является положительным результатом теста. При отсутствии аналита в образце конъюгат связывается с антивидовыми антителами только на контрольной линии, образуя одну линию на тест-полоске (рис. 14).

Рис. 14. Схема прямого (сэндвичного) ИХА

Метод прямого ИХА используется для выявления высокомолекулярных соединений – вирусов, в т.ч. ВИЧ; различных гормонов (например, в тестах на беременность), возбудителей инфекционных заболеваний.

Схема сэндвичного ИХА не подходит для определения низкомолекулярных веществ, т.к. для образования сэндвича Ат-Аг-Ат антиген должен иметь по крайней мере две антигенные детерминанты (т.е. центра связывания с антителами). Кроме того, из-за стерических затруднений образование такого двойного комплекса с низкомолекулярным антигеном маловероятно. Поэтому для анализа небольших молекул, в том числе наркотических веществ, используется другая схема – непрямой конкурентный ИХА.

Метод конкурентого ИХА основан на конкуренции аналита и иммобилизованного конъгата аналит:белок-носитель за ограниченное количество центров связывания специфических антител, содержащихся в конъюгате Ат-метка. При нанесении образца, содержащего аналит, он связывается с конъюгатом Ат-метка на мембране с конъюгатом (рис. 15). Далее иммунокомплекс проходит через тестовую зону, где на иммобилизован конъгат аналит:белок-носитель. Иммунокомплекс не может связаться с этим конъюгатом из-за стерических затруднений: низкомолекулярные соединения обычно имеют одну антигенную детерминанту и, соответственно, антитела имеют один центр связывания с антигеном, который уже является занятым аналитом. Далее иммунный комплекс связывают антивидовые антитела, находящиеся на контрольной линии. В результате, отсутствие окрашенной полосы в контрольной зоне свидетельствует о том, что концентрация определяемого вещества в исследуемом образце превышает его пороговое значение для данного теста.

При отсутствии анализируемого вещества в образце конъюгат Ат-метка связывается с конъюгатом Аг:белок-носитель, иммобилизованным в зоне тестовой линии. Несвязавшийся конъюгат Ат-метка попадает в зону контрольной линии и связывается там с антивидовыми антителами. Таким образом, наличие двух окрашенных линий (тестовой и контрольной) является отрицательным результатом анализа (рис. 15). Формат конкурентного ИХА используется для выявления низкомолекулярных соединений, в том числе метаболитов наркотических соединений в моче, жидкости ротовой полости, экстрактах тканей.

Читайте также:  На что дает право генеральная доверенность на недвижимость

Схема оценки результатов ИХА наркотических веществ представлена на рис. 16. Результат теста является недействительным при отсутствии контрольной линии, т.к. этот факт может свидетельствовать о незавершенной процедуре анализа, либо о том, что иммунохимическая реакция не прошла должным образом по какой-либо причине (из-за испортившихся иммунореагентов или несоблюдения инструкции по применению теста).

Рис. 15. Схема конкурентного ИХА

Рис. 16. Схема оценки результатов ИХА метаболитов наркотических веществ

Часто, особенно в случаях когда недоступны большие количества биообразца для анализа, например, для определения наркотических веществ в слюне, используются тест-полоски в пластиковой кас-
сете (рис. 17).

Рис. 17. Пластиковый корпус иммунохроматографического теста

В качестве меток в ИХА используются различные частицы, обладающие следующими свойствами:

1. Красящие вещества (нано-частицы коллоидного золота или углерода, или частицы окрашенного латекса). В этом случае используется визуальная детекция результата, либо приборное рефлектометрическое определение (например, сканирование). Использование различных красящих меток, присоединенных к частицам латекса, позволяет проводить мильтианализ, в котором линии разного цвета соответствуют различным аналитам. Наиболее часто используемой меткой является нано-частицы коллоидного золота, которые образуют линии темно-бурого (или темно-розового) цвета.

2. Флуоресцентные, фосфоресцентные и биолюминисцентные метки, ковалентно связанные с частицами латекса. Эти метки используются только в приборных вариантах ИХА, когда результат регистрируется специальным ридером. Среди вышеуказанных наиболее распространены флуоресцентные метки.

3. Парамагнитные метки (также закрепленные на частицах латекса). Данный вид меток используется в ИХА с применением приборов, регистрирующих силу магнитного поля.

4. Ферментные метки используются по тому же принципу, что и в ИФА. Ферментативная реакция регистрируется с помощью окрашивания субстратов, и результат анализа является визуальным, или считывается с помощью ридера.

5) Новым направлением в разработке различных разновидностях ИХА является использование липосом в качестве носителей различного рода меток (красящих, флуоресцентных, ферментативных, электроактивных и пр.) [17].

Разработка технологических стадий иммунохроматографического анализа является наукоемким, высокотехнологичным и многостадийным процессом: он включает в себя подбор материалов, реагентов и условий проведения анализа на нескольких этапах разработки ИХА. Перечислим основные этапы разработки:

● выбор материалов для производства тест-полосок;

● подбор оптимальных концентраций иммунореагентов: конъюгатов Ат-метка, конъюгатов антиген-белок-носитель, антивидовых антител;

● подбор дополнительных реагентов для предобработки компонентов тест-полоски (позволяет улучшить свойства потока, и тем самым обеспечить лучшую чувствительность теста);

● подбор реагентов и их концентраций для «забивки» мембраны, если это необходимо (позволяет улучшить характеристики анализа и стабильность теста);

● оптимизация условий проведения анализа реальных образцов;

● изучение стабильности тест-системы, выбор условий хранения и упаковки для увеличения срока хранения тестов.

На рис. 18 представлена схема производства иммунохроматографических тестов. На каждом этапе данной технологической схемы должна быть произведен выбор материалов и реагентов, оптимизация условий проведения технологической стадии.

Все компоненты тест-полоски (фильтр, мембрана с конъюгатом, хроматографическая мембрана, мембрана абсорбции, см. рис. 13) приклеиваются на пластиковую подложку. Подложка – это лист, состоящий из пластика и имеющий клейкое покрытие. При выборе подложки необходимо обращать внимание на качество клея (это может напрямую влиять на характеристики хроматографической мембраны, которая будет приклеена на подложку) и удобство покрывающей пленки (что обеспечивает точность приклеивания компонентов полоски на подложку).

При выборе материала фильтра для образца необходимо руководствоваться теми функциями, которые должен выполнять фильтр:

● впитать достаточное количество образца и доставить его в мембрану для конъюгата;

● довести рН образца до оптимального;

● увеличить или уменьшить вязкость образца для достижения оптимальной скорости прохождения образца по хроматографической мембране;

● увеличить способность образца растворить конъюгат;

● уменьшить забивку мембраны за счет добавления забивки в прокладку для образца.

Рис. 18. Схема стадий производства иммунохроматографических тестов

Фильтры выпускаются из различных пористых материалов: целлюлозы, стекловолокна, тканных сит. Мембраны для конъюгатов производят из стекловолокна, целлюлозы, поверхностно модифицированного полиэфира или искусственных волокон. Подложка для конъюгата должна обладать высокой адсорбционной способностью с одной стороны, и легкостью «смывания» конъюгата из данной зоны, с другой. Т.е. при прохождении жидкости конъюгат должен хорошо десорбироваться из мембраны. При этом при сушке мембраны после нанесения раствора конъюгата не должно происходить изменение конформации антител и разрушения структуры конъюгата.

Читайте также:  Когда подается заявление на мат капитал

Хроматографическая мембрана – самый важный элемент иммунохроматографической полоски. Именно на ней проходит иммунохимическая реакция, происходит разделение и связывание иммунореагентов в тестовой и контрольной зонах. Мембрана является самой длинной зоной тест-полоски, именно здесь иммунореагенты проходят максимальный путь в латеральном потоке. При выборе материала для хроматографической мембраны необходимо руководствоваться следующими свойствами, которыми должна обладать мембрана:

1. Гидрофильность – необходима для возможности прохождения потока (а это водная среда) через мембрану. Обеспечивается выбором материала, а также использованием ПАВ.

2. Способность связывать белки: для формирования тестовой и контрольной линии на мембране необходимо закрепить белковые конъюгаты таким образом, чтобы они не смылись латеральным потоком. Белки «прикрепляются» к мембране с помощью электростатического взаимодействия: диполи, содержащиеся в нитроцеллюлозе, связывают диполи белков (рис. 19).

Рис. 19. Диполи нитроцеллюлозы и белков

Для лучшего закрепления белков на мембране после нанесения растворов конъюгатов и антител на мембрану используют «забивку» или блокировку мембраны: ее обрабатывают раствором инертного белка, чтобы занять все вакантные поры, в которые могли бы мигрировать молекулы белковых конъюгатов и антител, находящихся на контрольной и тестовой линиях. Кроме того, в растворах белков необходимо использовать буфер с нужной кислотностью, чтобы обеспечить максимальное электростатическое взаимодействие диполей нитроцеллюлозы и белков.

При производстве мембран для ИХА используются следующие материалы: нитроцеллюлоза (наиболее распространенный материал, используется в 99 % выпускаемых тест-полосок); нейлон; поливинилиденфторид; полиэфирсульфон; стекловолокно.

При выборе материала мембраны необходимо руководствоваться следующими ее физическими параметрами, которые характеризуют свойства латерального потока, проходящего через данную мембрану:

● толщина мембраны, ее объем слоя;

● пористость, размер и распределение пор;

● номинальная скорость потока;

● прочность (предел прочности на разрыв);

● качество поверхности: неровности, порошок и пыль, оставшиеся на поверхности после производства материала.

Все перечисленные характеристики формируют в конечном итоге главный параметр иммунохроматографической мембраны – скорость латерального потока, определяющий все основные параметры ИХА (рис. 20).

Рис. 20. Влияние скорости потока на характеристики анализа

Все вышеописанные подробности приведены для того, чтобы дать представление о сложности процесса разработки и производства на первый взгляд простых тест-полосок. Для того чтобы получить действительно работающий качественный тест, необходимо очень тщательно пройти все стадии разработки и наладки производства. К сожалению, не все нынешние производители это делают на должном уровне, экономя средства для достижения минимальных цен на рынке. В результате мы имеем общепринятое мнение о неточности ИХА тестов. В то же время качественный ИХА тест может иметь характеристики не хуже, чем тест-система для приборного метода ИФА [17].

Современные материалы и возможности тщательного подбора условий при производстве ИХА тестов позволяют разработать даже количественные варианты ИХА. В этом случае детекция результата осуществляется с помощью специальных считывающих устройств – ридеров для ИХА. В зависимости от типа метки, данные устройства осуществляют различные способы детекции: рефрактометрический, флуоресцентный, магнитный (рис. 21).

Рис. 21. Считывающие устройства для детекции результатов ИХА

Рис. 22. Автоматическая платформа для производства ИХА полосок

Количественный формат ИХА характеризуется гораздо большими требованиями к качеству тест-полосок, и, следовательно, к контролю качества каждой стадии производства тестов. Кроме качества материалов и реагентов, на каждой стадии производства необходимо четко, с высокой точностью, контролировать температуру, влажность, концентрацию реагентов, скорость подачи материалов, давления прессов и т.д. Только в этом случае можно получить количественный ИХА тест. Столь высокие требования возможно выполнить только с использованием специальных закрытых, полностью автоматизированных платформ, в которых каждый из параметров контролируется и поддерживается с высокой точностью (рис. 22).

Источник

Поделиться с друзьями
МальтаВиста